www.chinacdoe.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን።እየተጠቀሙበት ያለው የአሳሽ ስሪት የተወሰነ የሲኤስኤስ ድጋፍ አለው።ለበለጠ ልምድ፣ የዘመነ አሳሽ እንድትጠቀም እንመክርሃለን (ወይም የተኳኋኝነት ሁነታን በኢንተርኔት ኤክስፕሎረር አሰናክል)።እስከዚያው ድረስ ቀጣይ ድጋፍን ለማረጋገጥ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናቀርባለን።
የላብራቶሪ-አ-ቺፕ ሲስተሞች በቦታው ላይ አቅም ያላቸው ፈጣን እና ትክክለኛ የመመርመሪያ እድል ይሰጣሉ እና ባዮሜዲካል መሳሪያዎች እና የሰለጠኑ ባለሙያዎች በሌሉበት በንብረት በተገደቡ ቦታዎች ጠቃሚ ናቸው።ነገር ግን፣ ለባለብዙ-ተግባር አቅርቦት፣ በትዕዛዝ መልቀቅ፣ አስተማማኝ አፈጻጸም እና የረዥም ጊዜ ሪጀንቶችን ለማከማቸት ሁሉም አስፈላጊ ባህሪያት ያለው የእንክብካቤ ሙከራ ስርዓት መፍጠር ትልቅ ፈተና ሆኖ ቀጥሏል።እዚህ ላይ ፈሳሾችን በማንኛውም አቅጣጫ የሚቆጣጠር፣ ለተተገበረ የአየር ግፊት ትክክለኛ እና ተመጣጣኝ ምላሽ የሚሰጥ እና ከድንገተኛ እንቅስቃሴዎች እና ንዝረቶች ጋር የሚረጋጋ የማይክሮ ተጓዥ ማብሪያ ቴክኖሎጂን እዚህ እንገልፃለን።በቴክኖሎጂው ላይ በመመስረት፣ የ reagent መግቢያን፣ ቅልቅል እና ምላሽ ተግባራትን በአንድ ሂደት ውስጥ የሚያጣምረው የ polymerase chain reaction ስርዓት እድገትን እንገልፃለን ይህም ከ 18 ታካሚዎች የተወሰዱ ክሊኒካዊ የአፍንጫ ናሙናዎች ሁሉ "ናሙና-መልስ" አፈፃፀምን ያከናውናል. ኢንፍሉዌንዛ እና 18 የግለሰቦች ቁጥጥሮች፣ በጥሩ ሁኔታ የፍሎረሰንስ ኢንቴንሽን ከመደበኛው የ polymerase chain reaction (Pearson coefficients> 0.9) ጋር።በቴክኖሎጂው ላይ በመመስረት፣ የ reagent መግቢያ፣ ቅልቅል እና ምላሽ ተግባራትን በአንድ ሂደት ውስጥ የሚያጠቃልለው የ polymerase chain reaction ስርዓት መፈጠሩን እንገልፃለን ይህም ከ 18 ታካሚዎች ለሁሉም ክሊኒካዊ የአፍንጫ ናሙናዎች "ናሙና-መልስ" አፈፃፀምን ያከናውናል. ከኢንፍሉዌንዛ እና 18 የግለሰቦች ቁጥጥር ጋር፣ በጥሩ ሁኔታ የፍሎረሰንስ ጥንካሬ ከመደበኛ የ polymerase chain reaction (Pearson coefficients> 0.9) ጋር።Основыывв нээнолиии, мехноле опрабоем ооцмабной котной оепной оъънцц ооенной оъъъцц оъъНцц унки и ведения и сешакив в цесццм процессе, прессе, вреесивтеццц выеетцц--цет - выхооц- выхоооц-дсеоооц клинических обрацов иациеов пациентов с риир и 18 отельныh kontroley, в ሆሮሺም соответви и ненесивныsty флуоресници со ስታንዳርት ፓይ ፍቺ Пирсона> 0,9)።በዚህ ቴክኖሎጂ መሰረት፣ እንዲሁም በመርፌ፣ በመደባለቅ እና በአንድ ሂደት ውስጥ ምላሽ የመስጠት ተግባራትን የሚያጣምረው የ polymerase chain reaction ስርዓት መፈጠሩን እንገልፃለን፣ ይህም ከ18 የኢንፍሉዌንዛ በሽተኞች ላሉት ክሊኒካዊ የአፍንጫ ናሙናዎች ሁሉ ናሙና-በ ምላሽ መስጠት ያስችላል።እና 18 የግለሰብ መቆጣጠሪያዎች፣ ከመደበኛው የ polymerase chain reaction fluorescence intensity (Pearson's coefficients> 0.9) ጋር በጥሩ ስምምነት።በዚህ ቴክኖሎጂ ላይ በመመስረት, እኛ ደግሞ ሁሉንም ክሊኒካዊ የአፍንጫ ናሙናዎች ከ 18 ናሙና የአፍንጫ ሕመምተኛ ናሙናዎች ለመተንተን, የ reagent መርፌን, ቅልቅል እና ምላሽ ተግባራትን የሚያዋህድ የ polymerase chain reaction ስርዓት እድገትን እንገልፃለን. የኢንፍሉዌንዛ እና የ 18 የግለሰብ መቆጣጠሪያዎች, የፍሎረሰንት ጥንካሬ ተዛምዷል. በደንብ ከመደበኛ የ polymerase chain reaction (Pearson's Coefficient> 0.9) ጋር።የታቀደው መድረክ የባዮሜዲካል ትንተና አስተማማኝ አውቶማቲክ ዋስትና ይሰጣል እና በዚህም የተለያዩ የእንክብካቤ መሞከሪያ መሳሪያዎችን ለገበያ ማቅረቡን ሊያፋጥን ይችላል።
እንደ 2020 የኮቪድ-19 ወረርሽኝ በሚሊዮን የሚቆጠሩ ሰዎችን ህይወት የቀጠፈ የሰው ልጅ በሽታዎች በአለም አቀፍ ጤና እና በሰው ልጅ ስልጣኔ ላይ ከፍተኛ ስጋት ይፈጥራሉ።የቫይረሱን ስርጭት ለመቆጣጠር እና የሕክምና ውጤቶችን ለማሻሻል ቀደም ብሎ፣ ፈጣን እና ትክክለኛ በሽታዎችን መለየት ወሳኝ ነው።የሙከራ ናሙናዎች ወደ ሆስፒታሎች ወይም የምርመራ ክሊኒኮች የሚላኩበት እና በባለሙያዎች የሚተዳደሩበት በማእከላዊ ቤተ-ሙከራዎች ላይ የተመሰረተ ዋና የምርመራ ስነ-ምህዳር በአሁኑ ጊዜ በዓለም ዙሪያ ወደ 5.8 ቢሊዮን ለሚጠጉ ሰዎች በተለይም በንብረት ውስን ቦታዎች ውስጥ ለሚኖሩ ሰዎች ተደራሽነቱን እየገደበ ነው።ውድ የሆኑ የባዮሜዲካል መሳሪያዎች እና ብቃት ያላቸው ልዩ ባለሙያዎች እጥረት ባለበት.ክሊኒኮች 2. ስለሆነም ርካሽ እና ለተጠቃሚ ምቹ የሆነ የላብራቶሪ-ላይ-ቺፕ ሲስተም በነጥብ-ኦፍ-እንክብካቤ ምርመራ (POCT) አቅም በመዘርጋት ለሐኪሞች ወቅታዊ የምርመራ መረጃን በመረጃ ላይ የተመሠረተ የምርመራ ውሳኔ እንዲወስዱ ማድረግ ያስፈልጋል። .እና ህክምና 3.
የዓለም ጤና ድርጅት (WHO) መመሪያዎች አንድ ሃሳባዊ POCT በተመጣጣኝ ዋጋ፣ ለተጠቃሚ ምቹ (በትንሽ ስልጠና ለመጠቀም ቀላል)፣ ትክክለኛ (ሐሰት አሉታዊ ወይም የውሸት አወንታዊ ውጤቶችን አስወግድ)፣ ፈጣን እና አስተማማኝ (ጥሩ የመደጋገም ባህሪያትን የሚያቀርብ) እና እና ሊደርስ የሚችል (የረጅም ጊዜ ማከማቻ የሚችል እና ለዋና ተጠቃሚዎች በቀላሉ የሚገኝ)4.እነዚህን መስፈርቶች ለማሟላት፣ POCT ሲስተሞች የሚከተሉትን ባህሪያት ማቅረብ አለባቸው፡- በእጅ የሚደረግ ጣልቃ ገብነትን ለመቀነስ ሁለገብ የመድኃኒት መጠን፣ ለትክክለኛው የፈተና ውጤቶች በትዕዛዝ የሚለቀቅ የሬጀንት ትራንስፖርት መጠን እና የአካባቢ ንዝረትን ለመቋቋም አስተማማኝ አፈፃፀም።በአሁኑ ጊዜ በስፋት ጥቅም ላይ የዋለው የ POCT መሳሪያ የላተራል ፍሰት ስትሪፕ5,6 የበርካታ ባለ ቀዳዳ የኒትሮሴሉሎዝ ሽፋኖችን ያካተተ ሲሆን ይህም በጣም ትንሽ መጠን ያለው ናሙና ወደፊት የሚገፋ ሲሆን ይህም በቅድሚያ የማይንቀሳቀሱ ሬጀንቶችን በካፒላሪ ኃይል ምላሽ ይሰጣል.ምንም እንኳን ዝቅተኛ ዋጋ፣ የአጠቃቀም ቀላልነት እና ፈጣን ውጤት ቢኖራቸውም፣ ፍሰት ስትሪፕ ላይ የተመሰረቱ የPOCT መሳሪያዎች ለባዮሎጂካል ምርመራዎች (ለምሳሌ፣ የግሉኮስ ምርመራዎች7፣8 እና የእርግዝና ሙከራዎች9፣10) ባለብዙ ደረጃ ትንታኔዎችን ሳያስፈልጋቸው ብቻ መጠቀም ይችላሉ።ምላሾች (ለምሳሌ የበርካታ ሬጀንቶች መጫን፣ማደባለቅ፣ማባዛት)።በተጨማሪም የፈሳሽ እንቅስቃሴን የሚቆጣጠሩት አንቀሳቃሽ ሃይሎች (ማለትም፣ ካፊላሪ ሃይሎች) ጥሩ ወጥነት ያለው አቋም ስለማይሰጡ፣ በተለይም በቡድኖች መካከል፣ ይህ ደግሞ ደካማ የመባዛት ችሎታ11 እና የጎን ፍሰት ባንዶችን በዋነኛነት ለጥሩ ማወቅ12፣13።
በጥቃቅንና ናኖስኬል የተስፋፋ የማምረት አቅም ለቁጥር መለኪያዎች የማይክሮ ፍሎይድ POCT መሳሪያዎችን ለማዘጋጀት እድሎችን ፈጥሯል14,15,16,17.የበይነገጽ 18, 19 እና የቻነሎች 20, 21, 22 ጂኦሜትሪ ባህሪያትን በማስተካከል የእነዚህ መሳሪያዎች የካፒታል ኃይል እና ፍሰት መጠን መቆጣጠር ይቻላል.ነገር ግን፣ አስተማማኝነታቸው፣ በተለይም በጣም እርጥብ ላደረጉ ፈሳሾች፣ በአምራችነት ጉድለቶች፣ በቁሳቁስ ጉድለቶች እና ለአካባቢ ንዝረት የመነካት ስሜት ተቀባይነት የለውም።በተጨማሪም, በፈሳሽ-ጋዝ መገናኛ ላይ የካፒታል ፍሰት ስለሚፈጠር, በተለይም የማይክሮፍሉይድ ቻናልን በፈሳሽ ከሞሉ በኋላ ምንም ተጨማሪ ፍሰት ማስተዋወቅ አይቻልም.ስለዚህ, ለበለጠ ውስብስብ ምርመራ, በርካታ የናሙና መርፌ እርምጃዎች መከናወን አለባቸው24,25.
በማይክሮፍሉይድ መሳሪያዎች መካከል ሴንትሪፉጋል ማይክሮፍሉዲክ መሳሪያዎች በአሁኑ ጊዜ ለ POCT26,27 ምርጥ መፍትሄዎች አንዱ ናቸው.የማሽከርከር ዘዴው የሚጠቀመው የማሽከርከር ፍጥነቱን በማስተካከል የመንዳት ሃይሉን መቆጣጠር ስለሚቻል ነው።ነገር ግን ጉዳቱ የሴንትሪፉጋል ሃይል ሁል ጊዜ ወደ መሳሪያው ውጫዊ ጠርዝ የሚመራ በመሆኑ ለተወሳሰቡ ትንታኔዎች የሚያስፈልጉትን ባለብዙ ደረጃ ምላሾች ተግባራዊ ለማድረግ አስቸጋሪ ያደርገዋል።ምንም እንኳን ተጨማሪ የመንዳት ሃይሎች (ለምሳሌ ካፒላሪስ 28, 29 እና ሌሎች ብዙ 30, 31, 32, 33, 34, 35) ከሴንትሪፉጋል ኃይል በተጨማሪ ለ multifunctional dosing ቢገቡም, እነዚህ ተጨማሪ ኃይሎች በአጠቃላይ ትዕዛዝ በመሆናቸው ያልተጠበቀ ፈሳሽ ማስተላለፍ አሁንም ሊከሰት ይችላል. ከሴንትሪፉጋል ሃይል ያነሰ መጠን ያላቸው፣ በትናንሽ የክወና ክልሎች ብቻ ውጤታማ ያደርጋቸዋል ወይም በፈሳሽ መለቀቅ በፍላጎት አይገኙም።እንደ ሴንትሪፉጋል ኪነቲክ ዘዴዎች 36፣ 37፣ 38፣ ቴርሞፕኒማቲክ ዘዴዎች 39 እና ንቁ የአየር ግፊት ዘዴዎች 40 ወደ ሴንትሪፉጋል ማይክሮፍሉይድስ ውስጥ የሳንባ ምች ማኒፑልስን ማካተት ማራኪ አማራጭ ሆኖ ተረጋግጧል።በፀረ-ፉጎዳይናሚክስ አቀራረብ ፣ ተጨማሪ ክፍተት እና ተያያዥ ማይክሮ ቻነሎች በመሣሪያው ውስጥ ለውጫዊ እና ውስጣዊ እርምጃዎች ይዋሃዳሉ ፣ ምንም እንኳን የፓምፕ ብቃቱ (ከ 75% እስከ 90% ባለው ክልል ውስጥ) በፓምፕ ዑደቶች ብዛት እና በ viscosity ላይ የተመሠረተ ነው። የፈሳሹን.በቴርሞፕኒማቲክ ዘዴ የላቲክስ ሽፋን እና የፈሳሽ ማስተላለፊያ ክፍል በተለይ የታፈነው የአየር መጠን ሲሞቅ ወይም ሲቀዘቅዝ መግቢያውን ለመክፈት ወይም ለመክፈት የተነደፉ ናቸው።ነገር ግን፣ የማሞቅ/የማቀዝቀዝ ውቅር አዝጋሚ ምላሽ ችግሮችን ያስተዋውቃል እና በቴርሞሴቲቭ ሙከራዎች (ለምሳሌ፣ polymerase chain reaction (PCR) amplification) ላይ መጠቀምን ይገድባል።በነቃ የሳንባ ምች አካሄድ፣ በፍላጎት መለቀቅ እና ወደ ውስጥ መንቀሳቀስ የሚቻለው በአንድ ጊዜ አዎንታዊ ግፊት እና በትክክል በተዛመደ የማሽከርከር ፍጥነት በከፍተኛ ፍጥነት ባላቸው ሞተሮች በመጠቀም ነው።በአየር ግፊት (pneumatic actuators) ብቻ (አዎንታዊ ግፊት 41, 42 ወይም አሉታዊ ግፊት 43) እና በተለምዶ የተዘጉ የቫልቭ ንድፎችን በመጠቀም ሌሎች ስኬታማ አቀራረቦች አሉ.በሳንባ ምች ክፍል ውስጥ በተከታታይ ግፊትን በመተግበር ፈሳሹ ወደ ፊት ወደ ፊት ይተላለፋል እና በተለምዶ የተዘጋው ቫልቭ በፔሪስታሊሲስ ምክንያት የፈሳሹን ፍሰት ይከላከላል ፣ ስለሆነም ውስብስብ የፈሳሽ ስራዎችን ይገነዘባል።ይሁን እንጂ በአሁኑ ጊዜ በአንድ የPOCT መሣሪያ ውስጥ ውስብስብ ፈሳሽ ስራዎችን ሊያከናውኑ የሚችሉ የተወሰኑ የማይክሮፍሉዲክ ቴክኖሎጂዎች ብቻ አሉ, እነዚህም ባለብዙ-ተግባር ስርጭትን, በፍላጎት መልቀቅ, አስተማማኝ አፈፃፀም, የረጅም ጊዜ ማከማቻነት, ከፍተኛ- viscosity ፈሳሾችን አያያዝ. እና ወጪ ቆጣቢ ማምረት.ሁሉም በተመሳሳይ ጊዜ.ባለብዙ ደረጃ ተግባራዊ ኦፕሬሽን አለመኖር ጥቂት የንግድ POCT ምርቶች እንደ Cepheid፣ Binx፣ Visby፣ Cobas Liat እና Rhonda ያሉ ምርቶች ብቻ እስከ ዛሬ በክፍት ገበያ ላይ እንዲተዋወቁ ካደረጉት ምክንያቶች አንዱ ሊሆን ይችላል።
በዚህ ጽሑፍ ውስጥ በአረንጓዴ ቀለበት ማይክሮ ማብሪያ ቴክኖሎጂ (ፈጣን) ላይ የተመሠረተ የአየር ግፊት ማይክሮፍሉዲክ አንቀሳቃሽ እናቀርባለን።FAST ሁሉንም አስፈላጊ ንብረቶች በአንድ ጊዜ ያጣምራል ለብዙ አይነት ሬጀንቶች ከማይክሮሊተር እስከ ሚሊሊተር።FAST የላስቲክ ሽፋኖችን፣ ማንሻዎችን እና ብሎኮችን ያካትታል።የአየር ግፊትን ሳይተገበሩ ሽፋኖች, ማንሻዎች እና እገዳዎች በጥብቅ ይዘጋሉ እና በውስጡ ያለው ፈሳሽ ለረጅም ጊዜ ሊከማች ይችላል.ተገቢው ግፊት ሲደረግ እና ከመንጠፊያው ርዝመት ጋር ሲስተካከል, ድያፍራም ይስፋፋል እና ዘንዶውን ወደ ክፍት ቦታ ይገፋዋል, ይህም ፈሳሽ እንዲያልፍ ያስችለዋል.ይህ ባለብዙ ተግባር ፈሳሾችን በካስኬድ፣ በአንድ ጊዜ፣ በቅደም ተከተል ወይም በተመረጠ መንገድ ለመለካት ያስችላል።
የኢንፍሉዌንዛ ኤ እና ቢ ቫይረሶችን (IAV እና IBV) ፈልጎ ለማግኘት በናሙና ምላሽ ለመስጠት ፈጣን የ PCR ስርዓት አዘጋጅተናል።የ102 ኮፒ/ml ዝቅተኛ የማወቂያ (LOD) ወሰን አሳክተናል፣ የእኛ የባለብዙ ኤክስቴንሽን ዳሰሳ ለ IAV እና IBV እና የተፈቀደ የኢንፍሉዌንዛ ቫይረስ በሽታ አምጪነት አሳይቷል።ከ18 ታካሚዎች እና 18 ጤነኛ ግለሰቦች የተገኘውን የአፍንጫ የጥጥ ናሙና በመጠቀም የክሊኒካዊ ምርመራው ውጤት ከመደበኛ RT-PCR (Pearson Coefficients> 0.9) ጋር ጥሩ የፍሎረሰንሰንስ ጥንካሬን ያሳያል።ከ18 ታካሚዎች እና 18 ጤነኛ ግለሰቦች የተገኘውን የአፍንጫ የጥጥ ናሙና በመጠቀም የክሊኒካዊ ምርመራው ውጤት ከመደበኛ RT-PCR (Pearson Coefficients> 0.9) ጋር ጥሩ የፍሎረሰንሰንስ ጥንካሬን ያሳያል።Результы клинических испытаний смотреть бесплатно соответствие интенсивный флуоресценци ስታንዳርትኖይ ОТ-ПЦР (ኮኢፊሺሽን ፒርሶና > 0,9)።ከ18 ታካሚዎች እና 18 ጤነኛ ግለሰቦች የተወሰደ የአፍንጫ መታጠፊያ ናሙና በመጠቀም የክሊኒካዊ ሙከራዎች ውጤቶች በመደበኛ RT-PCR (Pearson's coefficients> 0.9) መካከል ባለው የፍሎረሰንት መጠን መካከል ጥሩ ስምምነት ያሳያሉ።0.9) …………………………………………………………………………. Результы клинических испытаний смотреть бесплатно соответствие между интенсивностью флуоресценци እና ስታንዳርትኖይ ОТ-ПЦР (ኮኢፊሺሽን ፒርሶና > 0,9)።ከ18 ታካሚዎች እና 18 ጤነኛ ግለሰቦች የአፍንጫ ስዋብ ናሙናዎችን በመጠቀም የክሊኒካዊ ሙከራዎች ውጤቶች በፍሎረሰንስ ኢንቴንሽን እና በመደበኛ RT-PCR (Pearson's Coefficient> 0.9) መካከል ጥሩ ስምምነት አሳይተዋል።የ FAST-POCT መሳሪያ የሚገመተው የቁሳቁስ ዋጋ በግምት US$1 (ተጨማሪ ሠንጠረዥ 1) እና በትላልቅ የማምረቻ ዘዴዎች (ለምሳሌ መርፌ መቅረጽ) በመጠቀም የበለጠ ሊቀነስ ይችላል።እንደ እውነቱ ከሆነ፣ FAST-based POCT መሣሪያዎች በWHO የታዘዙ ሁሉም አስፈላጊ ባህሪያት አሏቸው እና እንደ ፕላዝማ ቴርማል ብስክሌት 44 ፣ ማጉላት-ነጻ immunoassays45 እና nanobody functionalization tests46 የPOCT ስርዓቶች የጀርባ አጥንት ከሆኑ አዳዲስ ባዮኬሚካላዊ የፍተሻ ዘዴዎች ጋር ተኳሃኝ ናቸው።ዕድል.
በለስ ላይ.1a የ FAST-POCT መድረክ አወቃቀሩን ያሳያል, እሱም አራት ፈሳሽ ክፍሎችን ያካትታል-የቅድመ-ማከማቻ ክፍል, ድብልቅ ክፍል, የምላሽ ክፍል እና የቆሻሻ መጣያ ክፍል.የፈሳሽ ፍሰት መቆጣጠሪያ ቁልፉ በቅድመ-ማከማቻ ክፍል እና በመደባለቅ ክፍል ውስጥ የሚገኘው የ FAST ንድፍ (የላስቲክ ሽፋን፣ ማንሻ እና ብሎኮች ያካተተ) ነው።በአየር ግፊት የሚሰራ ዘዴ፣ FAST ንድፍ ትክክለኛ የፈሳሽ ፍሰት መቆጣጠሪያን ያቀርባል፣ ዝግ/ክፍት መቀያየርን፣ ሁለገብ መጠን መውሰድ፣ በፍላጎት ላይ ያለ ፈሳሽ መለቀቅ፣ አስተማማኝ ቀዶ ጥገና (ለምሳሌ፣ ለአካባቢ ንዝረት አለመቻቻል) እና የረጅም ጊዜ ማከማቻን ጨምሮ።የ FAST-POCT መድረክ አራት ንብርብሮችን ያቀፈ ነው-የኋላ ሽፋን ፣ የላስቲክ ፊልም ሽፋን ፣ የፕላስቲክ ፊልም ሽፋን እና የሽፋን ሽፋን ፣ በምስል 1 ለ በሰፋ እይታ እንደሚታየው (በተጨማሪም በስዕል S1 እና S2 ውስጥ በዝርዝር ይታያል) ).ሁሉም ቻናሎች እና የፈሳሽ ማጓጓዣ ክፍሎች (እንደ ቅድመ-ማከማቻ እና ምላሽ ክፍሎች ያሉ) ከ 0.2 ሚሜ (ቀጭኑ ክፍል) እስከ 5 ሚሜ ውፍረት ባለው በ PLA (polylactic acid) ውስጥ የተካተቱ ናቸው።የላስቲክ ፊልም ቁሳቁስ የ 300 µm ውፍረት ያለው ፒዲኤምኤስ የአየር ግፊት በሚተገበርበት ጊዜ "ቀጭን ውፍረት" እና ዝቅተኛ የመለጠጥ ሞጁል (2.25 MPa47 ገደማ) ምክንያት በቀላሉ የሚስፋፋ ነው።የፓይታይሊን ፊልም ንብርብር በአየር ግፊት ምክንያት የመለጠጥ ፊልሙን ከመጠን በላይ ከመበላሸት ለመከላከል በ 100 μm ውፍረት ከፓቲኢታይሊን ቴሬፍታሌት (PET) የተሰራ ነው።ከክፍሎቹ ጋር በተዛመደ, የንጥረ-ነገር ሽፋኑ የፈሳሹን ፍሰት ለመቆጣጠር በማጠፊያዎች ከሽፋኑ ንብርብር (ከ PLA) ጋር የተገናኙ ማንሻዎች አሉት.የመለጠጥ ፊልሙ ባለ ሁለት ጎን ማጣበቂያ ቴፕ (ARseal 90880) በመጠቀም ከጀርባው ሽፋን ጋር ተጣብቆ በፕላስቲክ ፊልም ተሸፍኗል።በሸፈነው ንብርብር ውስጥ የቲ-ክሊፕ ንድፍ በመጠቀም ሶስት እርከኖች በአንድ ንጣፍ ላይ ተሰብስበዋል.T-clamp በሁለት እግሮች መካከል ክፍተት አለው.ቅንጥቡ ወደ ጉድጓዱ ውስጥ ሲገባ ሁለቱ እግሮች በትንሹ ጎንበስ ብለው ወደ ቀድሞ ሁኔታቸው ይመለሳሉ እና በጉድጓዱ ውስጥ ሲያልፉ ክዳኑን እና ጀርባውን በጥብቅ ያስሩ (ተጨማሪ ምስል S1)።አራቱ ንብርብሮች ማገናኛዎችን በመጠቀም ይሰበሰባሉ.
የተለያዩ ተግባራዊ ክፍሎችን እና የ FAST ባህሪያትን የሚያሳይ የመድረክ ንድፍ ንድፍ።b የ FAST-POCT መድረክ ዲያግራም።ሐ ከአሜሪካ ሩብ ዶላር ሳንቲም አጠገብ ያለው የመድረክ ፎቶ።
የ FAST-POCT የመሳሪያ ስርዓት አሠራር በስእል 2 ይታያል. ዋና ዋናዎቹ ክፍሎች በመሠረቱ ንብርብር ላይ ያሉት እገዳዎች እና በሽፋኑ ሽፋን ላይ ያሉ ማጠፊያዎች ናቸው, ይህም አራት ንብርብሮች በቲ-ቅርጽ ሲገጣጠሙ ጣልቃ ገብነትን ያመጣል. .ምንም የአየር ግፊት በማይደረግበት ጊዜ (ምስል 2 ሀ) የጣልቃ መግባቱ ማጠፊያው መታጠፍ እና መበላሸት ያስከትላል እና የመለጠጥ ፊልሙን በእገዳው ላይ ለመጫን የማተም ኃይል በሊቨር በኩል ይተገበራል እና በማኅተሙ ውስጥ ያለው ፈሳሽ ይገለጻል። እንደ የታሸገ ሁኔታ.በስእል 2 ሀ ላይ በጎን በኩል እንደሚታየው በዚህ ሁኔታ ውስጥ ዘንዶው ወደ ውጭ መታጠፍ እንዳለበት ልብ ሊባል ይገባል.አየር በሚሰጥበት ጊዜ (ምስል 2 ለ) የመለጠጥ ሽፋኑ ወደ ሽፋኑ ወደ ውጭ በመስፋፋቱ እና ማንሻውን ወደ ላይ በመግፋት በሊቨር እና በማገጃው መካከል ፈሳሽ ወደ ቀጣዩ ክፍል ውስጥ እንዲገባ ክፍተት ይከፍታል ይህም እንደ ክፍት ሁኔታ ይገለጻል. .የአየር ግፊቱ ከተለቀቀ በኋላ ማንሻው ወደ መጀመሪያው ቦታው ሊመለስ እና በማጠፊያው የመለጠጥ ምክንያት ጥብቅ ሆኖ ሊቆይ ይችላል.የሊቨር እንቅስቃሴዎች ቪዲዮዎች በተጨማሪ ፊልም S1 ውስጥ ቀርበዋል.
ሀ. የመርሃግብር ንድፍ እና ፎቶግራፎች ሲዘጉ።ግፊቱ በማይኖርበት ጊዜ ተቆጣጣሪው ሽፋኑን በእገዳው ላይ ይጭነዋል, ፈሳሹም ይዘጋል.ለ በጥሩ ሁኔታ ላይ.ግፊት በሚደረግበት ጊዜ ሽፋኑ ይስፋፋል እና ማንሻውን ወደ ላይ ስለሚገፋው ሰርጡ ይከፈታል እና ፈሳሽ ሊፈስ ይችላል.ሐ የወሳኙን ግፊት የባህሪ መጠን ይወስኑ።የባህሪይ ልኬቶች የሊቨር (L) ርዝመት፣ በተንሸራታች እና በማጠፊያው (l) መካከል ያለው ርቀት እና የሊቨር ፕሮቲን (t) ውፍረት ያካትታሉ።Fs በስሮትል ነጥብ B ላይ ያለው የመጨመቂያ ኃይል ነው.q በሊቨር ላይ ያለው ወጥ የሆነ የተከፋፈለ ጭነት ነው።Tx* በተጠማዘዘ ሊቨር የተገነባውን ጉልበት ይወክላል።ወሳኝ ግፊት መቆጣጠሪያውን ከፍ ለማድረግ እና ፈሳሹ እንዲፈስ ለማድረግ የሚያስፈልገው ግፊት ነው.d በወሳኝ ግፊት እና በንጥል መጠን መካከል ያለው ግንኙነት የንድፈ እና የሙከራ ውጤቶች.n = 6 ገለልተኛ ሙከራዎች ተካሂደዋል እና መረጃው እንደ ± መደበኛ ልዩነት ይታያል።ጥሬ መረጃ እንደ ጥሬ ውሂብ ፋይሎች ቀርቧል።
በጂኦሜትሪክ መመዘኛዎች ላይ ክፍተቱ የሚከፈትበትን የወሳኙን ግፊት ፒሲ ጥገኛነት ለመተንተን በጨረር ንድፈ ሀሳብ ላይ የተመሠረተ የትንታኔ ሞዴል ተዘጋጅቷል (ለምሳሌ ፣ L የሊቨር ርዝመት ፣ l በብሎክ እና በ ማንጠልጠያ, S ማንሻ ነው ከፈሳሹ ጋር ያለው የመገናኛ ቦታ t የሊቨር ፕሮቲን ውፍረት ነው, በስእል 2 ሐ).በማሟያ ማስታወሻዎች እና ማሟያ ምስል S3 ላይ በዝርዝር እንደተገለፀው ክፍተቱ የሚከፈተው \({P}_{c}\ge \frac{2{F}_{s}l}{SL}\) ሲሆን Fs የማሽከርከር ኃይል ሲሆን \ ({T}_{x}^{\ast}(={F}_{s}l)\) ከጣልቃ ገብነት ጋር የተቆራኙትን ሃይሎች ለማስወገድ እና ማጠፊያው እንዲታጠፍ ማድረግ።የሙከራ ምላሹ እና የትንታኔው ሞዴል ጥሩ ስምምነትን ያሳያል (ምስል 2d) የሚያሳየው ወሳኝ ግፊት ፒሲ እየጨመረ በ t / l እና በመቀነስ L, ይህም በቀላሉ በክላሲካል ጨረሮች ሞዴል ይገለጻል, ማለትም ማሽከርከር በ t / Lift ይጨምራል. .ስለዚህ የእኛ የንድፈ ሃሳባዊ ትንታኔ በግልጽ እንደሚያሳየው ወሳኝ ግፊቱን የሊቨር ርዝመት L እና t / l ሬሾን በማስተካከል ውጤታማ በሆነ መንገድ መቆጣጠር እንደሚቻል ይህም ለ FAST-POCT መድረክ ንድፍ አስፈላጊ መሰረት ይሰጣል.
የ FAST-POCT መድረክ ሁለገብ ስርጭትን ይሰጣል (በስእል 3 ሀ ከመግቢያ እና ሙከራ ጋር የሚታየው) የተሳካው የ POCT በጣም አስፈላጊ ባህሪ ነው ፣ ፈሳሾች በማንኛውም አቅጣጫ እና በማንኛውም ቅደም ተከተል (ካስኬድ ፣ በተመሳሳይ ጊዜ ፣ በቅደም ተከተል) ወይም የተመረጠ መልቲቻናል ማከፋፈል .- የመጠን ተግባር.በለስ ላይ.3a(i) ሁለት ወይም ከዚያ በላይ ክፍሎች የተለያዩ ምላሽ ሰጪዎችን ለመለየት ብሎኮችን በመጠቀም እና ክፍት እና የተዘጉ ግዛቶችን የሚቆጣጠርበትን ምሳሪያ በመጠቀም የተገለበጠ የዶሲንግ ሁነታን ያሳያል።ግፊት በሚፈጠርበት ጊዜ ፈሳሹ ከላይ ወደ ታችኛው ክፍል በሸፍጥ መንገድ ይፈስሳል.የካስኬድ ክፍሎቹ በእርጥብ ኬሚካሎች ወይም ደረቅ ኬሚካሎች እንደ lyophilized ዱቄት ሊሞሉ እንደሚችሉ ልብ ሊባል ይገባል.በሙከራው ምስል 3a(i) ላይኛው ክፍል ላይ ያለው ቀይ ቀለም ከሰማያዊው ቀለም ዱቄት (መዳብ ሰልፌት) ጋር ወደ ሁለተኛው ክፍል ይፈስሳል እና ወደ ታችኛው ክፍል ሲደርስ ጥቁር ሰማያዊ ይሆናል።በተጨማሪም የሚቀዳውን ፈሳሽ የመቆጣጠሪያ ግፊት ያሳያል.በተመሳሳይ ሁኔታ, አንድ ሊቨር ከሁለት ክፍሎች ጋር ሲገናኝ, በምስል ላይ እንደሚታየው በአንድ ጊዜ መርፌ ሁነታ ይሆናል.3a(ii)፣ ግፊቱ በሚፈጠርበት ጊዜ ፈሳሹ በሁለት ወይም ከዚያ በላይ ክፍሎች ላይ ወጥ በሆነ መልኩ ሊሰራጭ ይችላል።ወሳኝ ግፊቱ በሊቨር ርዝማኔ ላይ የሚመረኮዝ ስለሆነ, የበለስ ላይ እንደሚታየው የመንገዱን ርዝመት ማስተካከል ይቻላል ተከታታይ መርፌ ንድፍ .3a (iii)ረጅሙ ሊቨር (በወሳኝ ግፊት ፒሲ_ሎንግ) ከቻምበር B ጋር ተገናኝቷል እና አጭር ሊቨር (በወሳኝ ግፊት Pc_short > ፒሲ_ሎንግ) ከቻምበር ሀ ጋር ተገናኝቷል። ግፊት P1 (Pc_long <P1 <Pc_short) ሲተገበር ቀይ ውስጥ ያለው ፈሳሽ ብቻ ወደ ክፍል B ሊፈስ ይችላል እና ግፊቱ ወደ P2 (> ፒሲ_ሾርት) ሲጨምር ሰማያዊው ፈሳሽ ወደ ክፍል A ሊፈስ ይችላል. ይህ ተከታታይ መርፌ ሁነታ በቅደም ተከተል ወደ ተዛማጅ ክፍሎቻቸው በሚተላለፉ ፈሳሾች ላይ ይሠራል, ይህም ለስኬታማ POCT ወሳኝ ነው. መሳሪያ.ረጅሙ ሊቨር (በወሳኝ ግፊት ፒሲ_ሎንግ) ከቻምበር B ጋር ተገናኝቷል እና አጭር ሊቨር (በወሳኝ ግፊት Pc_short > ፒሲ_ሎንግ) ከቻምበር ሀ ጋር ተገናኝቷል። ግፊት P1 (Pc_long
የባለብዙ ተግባር ምደባ፣ ማለትም (i) cascading፣ (ii) በአንድ ጊዜ፣ (iii) ተከታታይ፣ እና (iv) የተመረጠ ምደባ።ኩርባዎቹ የእነዚህን አራት የስርጭት ሁነታዎች የስራ ሂደት እና መለኪያዎችን ይወክላሉ.ለ የረዥም ጊዜ የማከማቻ ሙከራዎች ውጤቶች በተዳከመ ውሃ እና ኢታኖል ውስጥ።n = 5 ገለልተኛ ሙከራዎች ተካሂደዋል እና መረጃው እንደ ± sd ሐ ይታያል።የ FAST መሳሪያ እና የካፒላሪ ቫልቭ (CV) መሳሪያው በ (i) የማይንቀሳቀስ እና (ii) የንዝረት ግዛቶች ውስጥ ሲሆኑ የመረጋጋት ሙከራ ማሳያዎች።(iii) ለ FAST እና CV መሳሪያዎች በተለያየ የማዕዘን ድግግሞሾች የድምጽ መጠን እና ሰዓት።d የፈተና ውጤቶችን በፍላጎት ማተም (i) ፈጣን መሣሪያ እና (ii) የሲቪ መሣሪያ።(iii) የሚቆራረጥ የግፊት ሁነታን በመጠቀም ለ FAST እና CV መሳሪያዎች በድምጽ እና በጊዜ መካከል ያለው ግንኙነት።ሁሉም የመጠን አሞሌዎች, 1 ሴ.ሜ.ጥሬ መረጃ እንደ ጥሬ ውሂብ ፋይሎች ቀርቧል።
የረጅም ጊዜ ሪጀንቶችን ማከማቸት ሌላው ያልተሳካለት የPOCT መሳሪያ ጠቃሚ ባህሪ ሲሆን ይህም ያልሰለጠኑ ሰራተኞች ብዙ ሬጀንቶችን እንዲይዙ ያስችላቸዋል።ብዙ ቴክኖሎጂዎች የረጅም ጊዜ ማከማቻ (ለምሳሌ፡ 35 ማይክሮዲስፔንሰሮች፣ 48 blister packs እና 49 stick packs) ያላቸውን አቅም ሲያሳዩ፣ ጥቅሉን ለማስተናገድ የተለየ መቀበያ ክፍል ያስፈልጋል፣ ይህም ዋጋን እና ውስብስብነትን ይጨምራል።በተጨማሪም እነዚህ የማጠራቀሚያ ዘዴዎች በትዕዛዝ ማሰራጨት አይፈቅዱም እና በማሸጊያው ውስጥ በሚቀረው ትርፍ ምክንያት የሪኤጀንቶችን ብክነት ያስከትላሉ።የረጅም ጊዜ የማጠራቀሚያ አቅም በ CNC-machined PMMA ማቴሪያል በመጠቀም የተፋጠነ የህይወት ሙከራን በማካሄድ በትንሽ ሸካራነት እና በጋዝ መበከል (ተጨማሪ ምስል S5) ተረጋግጧል።የሙከራ መሳሪያው በ 65 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለ 9 ቀናት በዲዮኒዝድ ውሃ (ዲዮኒዝድ ውሃ) እና 70% ኢታኖል (ተለዋዋጭ መለዋወጫዎችን በማስመሰል) ተሞልቷል.ሁለቱም ዲዮኒዝድ ውሃ እና ኤታኖል የተከማቹት በአሉሚኒየም ፎይል በመጠቀም ከላይ ያለውን መዳረሻ ለመከልከል ነው።በሥነ ጽሑፍ ውስጥ የተዘገበው የአርሄኒየስ እኩልታ እና የፔኔትሬሽን ገቢር ኢነርጂ የእውነተኛ ጊዜ አቻውን ለማስላት 50,51 ጥቅም ላይ ውለዋል።በለስ ላይ.3b በ 65 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለ 9 ቀናት የተከማቸ የ 5 ናሙናዎች አማካይ የክብደት መቀነሻ ውጤቶችን ያሳያል, ይህም ለ 0.30% ለዳይኖይድ ውሃ እና 0.72% ለ 70% ኢታኖል ከ 2 አመት በላይ በ 23 ° ሴ.
በለስ ላይ.3c የንዝረት ሙከራን ያሳያል.ካፒላሪ ቫልቭ (ሲቪ) በነባር POCT28,29 መሳሪያዎች ውስጥ በጣም ታዋቂው ፈሳሽ አያያዝ ዘዴ ስለሆነ፣ 300 µm ስፋት እና 200 µm ጥልቀት ያለው የሲቪ መሣሪያ ለማነፃፀር ጥቅም ላይ ውሏል።ሁለቱም መሳሪያዎች በማይቆሙበት ጊዜ በ FAST-POCT መድረክ ውስጥ ያለው ፈሳሽ ይዘጋዋል እና በሲቪ መሳሪያው ውስጥ ያለው ፈሳሽ በሰርጡ ድንገተኛ መስፋፋት ምክንያት ይቆለፋል, ይህም የካፒላሪ ሃይሎችን ይቀንሳል.ነገር ግን፣ የምሕዋር ነዛሪ አንግል ድግግሞሽ ሲጨምር፣ በ FAST-POCT መድረክ ውስጥ ያለው ፈሳሽ እንደታሸገ ይቆያል፣ ነገር ግን በሲቪ መሳሪያው ውስጥ ያለው ፈሳሽ ወደ ታችኛው ክፍል ውስጥ ይፈስሳል (ተጨማሪ ፊልም S3 ይመልከቱ)።ይህ የሚያሳየው የ FAST-POCT መድረክ የሚበላሹ ማጠፊያዎች በክፍሉ ውስጥ ያለውን ፈሳሽ በጥብቅ ለመዝጋት ኃይለኛ ሜካኒካል ኃይልን ወደ ሞጁሉ ሊተገበር ይችላል።ይሁን እንጂ በሲቪ መሳሪያዎች ውስጥ ፈሳሽ በጠንካራ, በአየር እና በፈሳሽ ደረጃዎች መካከል ባለው ሚዛን ምክንያት ይቆያል, አለመረጋጋት ይፈጥራል, እና ንዝረት ሚዛኑን ሊያዛባ እና ያልተጠበቀ የፍሰት ባህሪን ሊያስከትል ይችላል.የ FAST-POCT መድረክ ጥቅሙ አስተማማኝ ተግባራትን ያቀርባል እና አብዛኛውን ጊዜ በወሊድ እና በሚሠራበት ጊዜ የሚከሰቱ ንዝረቶች በሚኖሩበት ጊዜ ውድቀቶችን ማስወገድ ነው.
ሌላው የ FAST-POCT መድረክ አስፈላጊ ባህሪ በጥያቄ ላይ መውጣቱ ነው፣ ይህም ለቁጥር ትንተና ቁልፍ መስፈርት ነው።በለስ ላይ.3d በፍላጎት የሚለቀቀውን የFAST-POCT መድረክ እና የሲቪ መሳሪያውን ያወዳድራል።ከበለስ.3d(iii) የ FAST መሳሪያው ለግፊት ምልክት በፍጥነት ምላሽ እንደሚሰጥ እናያለን።በ FAST-POCT መድረክ ላይ ግፊት ሲደረግ, ፈሳሹ ፈሰሰ, ግፊቱ ሲወጣ, ፍሰቱ ወዲያውኑ ቆሟል (ምስል 3d (i)).ይህ ድርጊት በፍጥነት በሚለጠጥ የመለጠጥ መመለሻ ሊገለጽ ይችላል ፣ እሱም ዘንዶውን ወደ እገዳው ይጭናል ፣ ክፍሉን ይዘጋል።ነገር ግን፣ ፈሳሽ በሲቪ መሳሪያው ውስጥ መፍሰሱን ቀጠለ፣ በመጨረሻም ግፊቱ ከተለቀቀ በኋላ ያልተጠበቀ የፈሳሽ መጠን ወደ 100 µl ተፈጠረ (ምስል 3d(ii) እና ተጨማሪ ፊልም S4)።ይህ ከመጀመሪያው መርፌ በኋላ ሲቪ ሙሉ በሙሉ እርጥብ በሚሆንበት ጊዜ የካፒታል ፒኒንግ ተጽእኖ በመጥፋቱ ሊገለጽ ይችላል.
በተመሳሳዩ መሳሪያ ውስጥ የተለያየ የእርጥበት መጠን እና viscosity ፈሳሾችን የማስተናገድ ችሎታ ለPOCT መተግበሪያዎች ፈታኝ ሆኖ ይቆያል።ደካማ የእርጥበት መጠን ወደ ማፍሰሻዎች ወይም ወደ ቻናሎች ያልተጠበቀ ፍሰት ባህሪን ሊያመጣ ይችላል, እና እንደ vortex mixers, centrifuges እና filters የመሳሰሉ ረዳት መሳሪያዎች ከፍተኛ መጠን ያለው ፈሳሽ ፈሳሽ ለማዘጋጀት ብዙውን ጊዜ 52 .በወሳኝ ግፊት እና በፈሳሽ ባህሪያት መካከል ያለውን ግንኙነት ሞከርን (በሰፋፊ የእርጥበት መጠን እና viscosity)።ውጤቶቹ በሰንጠረዥ 1 እና ቪዲዮ S5 ውስጥ ይታያሉ።የተለያዩ የእርጥበት እና የቪዛነት ፈሳሾች በክፍሉ ውስጥ ሊታሸጉ እንደሚችሉ እና ጫና በሚፈጠርበት ጊዜ እስከ 5500 cP የሚደርስ viscosity ያላቸው ፈሳሾች እንኳን ወደ ጎረቤት ክፍል ሊተላለፉ ይችላሉ, ይህም ከፍተኛ ናሙናዎችን ለመለየት ያስችላል. viscosity (ማለትም አክታ፣ የመተንፈሻ አካላት በሽታዎችን ለመመርመር የሚያገለግል በጣም ዝልግልግ ናሙና)።
ከላይ ያሉትን ሁለገብ አገልግሎት የሚሰጡ ማከፋፈያ መሳሪያዎችን በማጣመር ሰፊ የሆነ FAST-based POCT መሳሪያዎችን ማዘጋጀት ይቻላል።አንድ ምሳሌ በስእል 1 ይታያል. እፅዋቱ የቅድመ-ማጠራቀሚያ ክፍል, ድብልቅ ክፍል, የምላሽ ክፍል እና የቆሻሻ ማጠራቀሚያ ክፍል ይዟል.ሬጀንቶች በቅድመ-ማከማቻ ክፍል ውስጥ ለረጅም ጊዜ ሊቀመጡ እና ከዚያም ወደ ድብልቅ ክፍል ውስጥ ሊወጡ ይችላሉ።በትክክለኛው ግፊት, የተደባለቁ ሪአክተሮች ተመርጠው ወደ ቆሻሻ ክፍል ወይም ወደ ምላሽ ክፍል ሊተላለፉ ይችላሉ.
PCR ማወቂያ እንደ H1N1 እና COVID-19 ያሉ በሽታ አምጪ ተህዋሲያንን ለመለየት የወርቅ ደረጃ ስለሆነ እና በርካታ የአጸፋ እርምጃዎችን ስለሚያካትት የ FAST-POCT መድረክን PCR ለማግኘት እንደ መተግበሪያ ተጠቀምን።በለስ ላይ.4 የ FAST-POCT መድረክን በመጠቀም PCR የፈተና ሂደት ያሳያል።በመጀመሪያ፣ ኤሊቲንግ ሪአጀንት፣ ማግኔቲክ ማይክሮባድ ሪአጀንት፣ የመታጠቢያ መፍትሄ A፣ እና የማጠቢያው መፍትሄ W በቅደም ተከተል ወደ ቅድመ-ማከማቻ ክፍሎች E፣ M፣ W1 እና W2 ተጣሉ።የ RNA adsorption ደረጃዎች በ fig.4a እና የሚከተሉት ናቸው: (1) ግፊት P1 (= 0.26 ባር) ሲተገበር, ናሙናው ወደ ክፍል M ውስጥ ይንቀሳቀሳል እና ወደ ድብልቅ ክፍል ውስጥ ይወጣል.(2) የአየር ግፊት P2 (= 0.12 ባር) ከድብልቅ ክፍል ግርጌ ጋር በተገናኘ ወደብ A በኩል ይቀርባል.ምንም እንኳን በርካታ የማደባለቅ ዘዴዎች በPOCT መድረኮች ላይ ፈሳሾችን (ለምሳሌ እባብ መቀላቀል 53፣ የዘፈቀደ ማደባለቅ 54 እና ባች ማደባለቅ 55) የመቀላቀል ብቃታቸውን እና ውጤታማነታቸውን አሁንም አጥጋቢ አይደሉም።በፈሳሽ ውስጥ አረፋዎችን ለመፍጠር አየር ወደ ድብልቅው ክፍል የታችኛው ክፍል ውስጥ እንዲገባ የሚያደርግ የአረፋ ድብልቅ ዘዴን ይቀበላል ፣ ከዚያ በኋላ ኃይለኛ ሽክርክሪት በሰከንዶች ውስጥ ሙሉ በሙሉ መቀላቀል ይችላል።የአረፋ ድብልቅ ሙከራዎች ተካሂደዋል እና ውጤቶቹ በተጨማሪ ምስል S6 ውስጥ ቀርበዋል.የ 0.10 ባር ግፊት ሲተገበር, ሙሉ በሙሉ መቀላቀል 8 ሰከንድ ያህል እንደሚወስድ ማየት ይቻላል.ግፊቱን ወደ 0.20 ባር በመጨመር ሙሉ በሙሉ መቀላቀል በ 2 ሰከንድ ውስጥ ይደርሳል.የማደባለቅ ቅልጥፍናን ለማስላት ዘዴዎች በ ዘዴዎች ክፍል ውስጥ ቀርበዋል.(3) ዶቃዎቹን ለማውጣት የሩቢዲየም ማግኔትን ይጠቀሙ፣ ከዚያም P3 (= 0.17 bar) በፖርት P በኩል በመጫን ሪኤጀንቶችን ወደ ቆሻሻ ክፍል ይውሰዱ።በለስ ላይ.4b,c ከናሙናው ውስጥ ያሉትን ቆሻሻዎች ለማስወገድ የማጠቢያ ደረጃዎችን እንደሚከተለው ያሳያል: (1) ማጠቢያው መፍትሄ A ከክፍል W1 ወደ ግፊት ማደባለቅ ክፍል P1 ይወጣል.(2) ከዚያም የአረፋ ማደባለቅ ሂደቱን ያድርጉ.(3) የማጠቢያው መፍትሄ A ወደ ቆሻሻ ፈሳሽ ክፍል ይተላለፋል, እና በማቀላቀያው ክፍል ውስጥ የሚገኙት ማይክሮቦች በማግኔት ይወጣሉ.ማጠብ W (ምስል 4 ሐ) ከመታጠብ ጋር ተመሳሳይ ነበር (ምስል 4 ለ).እያንዳንዱ የማጠቢያ ደረጃ A እና W ሁለት ጊዜ መደረጉን ልብ ሊባል ይገባል.ምስል 4d አር ኤን ኤውን ከእንቁላሎቹ ለማውጣት የመለጠጥ ደረጃዎችን ያሳያል;የ elution እና የማደባለቅ የመግቢያ ደረጃዎች ከላይ ከተገለጹት የ RNA ማስታወቂያ እና የማጠብ ደረጃዎች ጋር ተመሳሳይ ናቸው.የኤሌክትሮማግኔቲክ ሪኤጀንቶች በፒ 3 እና ፒ 4 (= 0.23 ባር) ግፊት ወደ PCR ምላሽ ክፍል ሲዘዋወሩ የ PCR ምላሽ ክፍልን ክንድ ለመዝጋት ወሳኝ ግፊቱ ይደርሳል።በተመሳሳይም የፒ 4 ግፊቱ ምንባቡን ወደ ቆሻሻው ክፍል ለመዝጋት ይረዳል.ስለዚህ፣ የብዝሃ PCR ምላሾችን ለመጀመር ሁሉም የኤሌክትሮማግኔቲክ ሪጀንቶች በአራቱ PCR ምላሽ ክፍሎች መካከል በእኩል ተሰራጭተዋል።ከላይ ያለው አሰራር በተጨማሪ ፊልም S6 ቀርቧል።
በአር ኤን ኤ ማስታወቂያ ደረጃ, ናሙናው ወደ መግቢያው M ውስጥ ይገባል እና ቀደም ሲል ከተከማቸ የቢድ መፍትሄ ጋር ወደ ድብልቅ ክፍል ውስጥ ይገባል.ጥራጥሬዎችን ከተቀላቀለ እና ካስወገዱ በኋላ, ሬጀንቶች ወደ ቆሻሻ ክፍል ውስጥ ይሰራጫሉ.b እና c ደረጃዎችን በማጠብ, የተለያዩ ቀደም ሲል የተከማቹ ማጠቢያዎችን ወደ ማቅለጫው ክፍል ውስጥ ማስገባት እና ድንቹን ከተቀላቀለ እና ካስወገዱ በኋላ, ሪኤጀንቶችን ወደ ቆሻሻ ፈሳሽ ክፍል ያስተላልፉ.d Elution ደረጃ፡ የኤሉሽን ሪጀንቶችን፣ ቅልቅል እና ዶቃ ማውጣትን ካስተዋወቁ በኋላ ሬጀንቶቹ ወደ PCR ምላሽ ክፍል ይተላለፋሉ።ኩርባዎቹ የተለያዩ ደረጃዎችን የስራ ሂደት እና ተዛማጅ መለኪያዎች ያሳያሉ.ግፊት በግለሰብ ክፍሎች ውስጥ የሚፈጠረው ግፊት ነው.የድምጽ መጠን በተቀላቀለበት ክፍል ውስጥ ያለው ፈሳሽ መጠን ነው.ሁሉም የመጠን አሞሌዎች 1 ሴ.ሜ.ጥሬ መረጃ እንደ ጥሬ ውሂብ ፋይሎች ቀርቧል።
የ PCR ሙከራ ሂደት ተካሂዷል እና ተጨማሪ ምስል S7 የ 20 ደቂቃዎች የተገላቢጦሽ ጊዜ እና 60 ደቂቃዎች የሙቀት ብስክሌት ጊዜ (95 እና 60 ° ሴ) ጨምሮ የሙቀት መገለጫዎችን ያቀርባል ፣ አንድ የሙቀት ዑደት 90 ሰ (ተጨማሪ ፊልም S7)።.FAST-POCT ከተለመደው RT-PCR (ለአንድ የሙቀት ዑደት 180 ሰከንድ) አንድ የሙቀት ዑደት (90 ሰከንድ) ለማጠናቀቅ ያነሰ ጊዜ ይፈልጋል።ይህ በከፍተኛው የገጽታ ስፋት እና የድምጽ ሬሾ እና በማይክሮ-ፒሲአር ምላሽ ክፍል ዝቅተኛ የሙቀት መነቃቃት ሊገለጽ ይችላል።የካሜራው ወለል 96.6 ሚሜ 2 እና የክፍሉ መጠን 25 ሚሜ 3 ነው, ይህም የንጣፉን እና የመጠን ጥምርታ በግምት 3.86 ነው.ተጨማሪ ምስል S10 ላይ እንደሚታየው የእኛ መድረክ PCR የፈተና ቦታ ከኋላ ፓኔል ላይ ግሩቭ ያለው ሲሆን ይህም የ PCR ክፍል የታችኛው ክፍል 200 μm ውፍረት አለው.በሙቀት መቆጣጠሪያው ላይ ካለው የሙቀት መቆጣጠሪያ ወለል ጋር ተያይዟል, ይህም ከሙከራ ሳጥኑ ጀርባ ጋር ጥብቅ ግንኙነትን ያረጋግጣል.ይህ የመድረኩን የሙቀት መጠን መቀነስ ይቀንሳል እና የማሞቂያ / ማቀዝቀዣን ውጤታማነት ያሻሽላል.በሙቀት ብስክሌት ወቅት፣ በመድረክ ውስጥ ያለው ፓራፊን ይቀልጣል እና ወደ PCR ምላሽ ክፍል ውስጥ ይፈስሳል፣ ይህም reagent ትነት እና የአካባቢ ብክለትን ለመከላከል (ተጨማሪ ፊልም S8 ይመልከቱ)።
ሁሉም ከላይ የተገለጹት የ PCR ማወቂያ ሂደቶች ሙሉ በሙሉ በራስ ሰር የተሰሩ በብጁ የተሰራ ፈጣን-POCT መሳሪያ በመጠቀም ፕሮግራም የተደረገ የግፊት መቆጣጠሪያ ክፍል፣ መግነጢሳዊ ኤክስትራክሽን አሃድ፣ የሙቀት መቆጣጠሪያ አሃድ እና የፍሎረሰንት ሲግናል ቀረጻ እና ማቀነባበሪያ ክፍልን ያቀፈ ነው።ማስታወሻ፣ የ FAST-POCT መድረክን ለአር ኤን ኤ ማግለል ተጠቀምን እና ከዚያ የተወጡትን አር ኤን ኤ ናሙናዎች ለ PCR ምላሽ የ FAST-POCT ሲስተም እና የዴስክቶፕ PCR ሲስተም ለንፅፅር ተጠቅመንበታል።ውጤቶቹ በማሟያ ምስል S8 ላይ እንደሚታየው ከሞላ ጎደል ተመሳሳይ ነበሩ።ኦፕሬተሩ ቀላል ስራን ያከናውናል: ናሙናውን ወደ ኤም-ቻምበር ያስተዋውቃል እና የመሳሪያ ስርዓቱን ወደ መሳሪያው ውስጥ ያስገባል.የቁጥር ምርመራ ውጤቶች በ82 ደቂቃ አካባቢ ይገኛሉ።ስለ FAST-POCT መሳሪያዎች ዝርዝር መረጃ በማሟያ ስእል ውስጥ ይገኛል።C9, C10 እና C11.
በኢንፍሉዌንዛ ኤ (አይኤቪ)፣ ቢ (IBV)፣ ሲ (አይሲቪ) እና ዲ (አይዲቪ) ቫይረሶች የሚከሰት ኢንፍሉዌንዛ የተለመደ ዓለም አቀፍ ክስተት ነው።ከእነዚህ ውስጥ IAV እና IBV በጣም ከባድ ለሆኑ ጉዳዮች እና ወቅታዊ ወረርሽኞች ተጠያቂ ናቸው, ከ5-15% የሚሆነውን የዓለም ህዝብ በመበከል, ከ3-5 ሚሊዮን ከባድ ጉዳዮችን ያስከትላሉ እና 290,000-650,000 በየዓመቱ ለሞት ይዳርጋሉ.የመተንፈሻ አካላት በሽታዎች 56,57.የበሽታዎችን እና ተያያዥ ኢኮኖሚያዊ ሸክሞችን ለመቀነስ የ IAV እና IB ቅድመ ምርመራ አስፈላጊ ነው።ከሚገኙ የምርመራ ቴክኒኮች መካከል፣ የተገላቢጦሽ transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) በጣም ሚስጥራዊነት፣ ልዩ እና ትክክለኛ (>99%)58,59 ይቆጠራል።ከሚገኙ የምርመራ ቴክኒኮች መካከል፣ የተገላቢጦሽ transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) በጣም ሚስጥራዊነት፣ ልዩ እና ትክክለኛ (>99%)58,59 ይቆጠራል።Среди доступных диагностических методов полимеразная цепная реакция с обратной ትራንስkриптазой (ОТ-Псустой) тельной, специфичной и точной (> 99%)58,59.ካሉት የመመርመሪያ ዘዴዎች መካከል፣ የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕት ፖሊመሬሴ ሰንሰለት ምላሽ (RT-PCR) በጣም ሚስጥራዊነት ያለው፣ የተለየ እና ትክክለኛ (> 99%) 58,59 ይቆጠራል። Из доступных диагностических методов полимеразная цепная реакция с обратной ትራክን (ОТ-ፓቺስ) льной, специфичной и точной (>99%)58,59.ካሉት የመመርመሪያ ዘዴዎች፣ የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕት ፖሊሜሬሴን ሰንሰለት ምላሽ (RT-PCR) በጣም ሚስጥራዊነት ያለው፣ ልዩ እና ትክክለኛ (>99%)58,59 ተደርጎ ይወሰዳል።ነገር ግን፣ ባህላዊ የ RT-PCR ዘዴዎች ተደጋጋሚ የቧንቧ ዝርጋታ፣ ማደባለቅ፣ ማሰራጨት እና ፈሳሽ ማስተላለፍን ይጠይቃሉ፣ ይህም በሃብት-ውሱን ቅንብሮች ውስጥ በባለሙያዎች መጠቀማቸውን ይገድባል።እዚህ፣ የFAST-POCT መድረክ ዝቅተኛ የማወቂያ ገደባቸውን (LOD) ለማግኘት፣ IAV እና IBVን በቅደም ተከተል PCR ለማግኘት ጥቅም ላይ ውሏል።በተጨማሪም፣ IAV እና IBV ተባዝተው በተለያዩ የዝርያ ዓይነቶች መካከል ያለውን ልዩነት ለማድላት፣ ይህም ለጄኔቲክ ትንተና ተስፋ ሰጪ መድረክ እና በሽታውን በትክክል የማከም ችሎታ ይሰጣል።
በለስ ላይ.5a 150 μl የተጣራ የቫይረስ አር ኤን ኤ እንደ ናሙና በመጠቀም የHAV PCR ምርመራ ውጤቶችን ያሳያል።በለስ ላይ.5a (i) የሚያሳየው በ 106 ቅጂዎች / ml የ HAV መጠን, የፍሎረሰንት መጠን (ΔRn) ወደ 0.830 ሊደርስ ይችላል, እና ትኩረቱ ወደ 102 ቅጂዎች / ml ሲቀንስ, ΔRn አሁንም 0.365 ሊደርስ ይችላል, ይህም ከዚያ ከፍ ያለ ነው. ከባዶ አሉታዊ የቁጥጥር ቡድን (0.002) ፣ 100 ጊዜ ያህል ከፍ ያለ።በስድስት ገለልተኛ ሙከራዎች ላይ ተመስርቶ ለመጠቆም፣ በሎግ ማጎሪያ እና በ IAV ዑደት ገደብ (ሲቲ) መካከል (ምስል 5a(ii)) R2 = 0.993፣ ከ102-106 ቅጂዎች/ml መካከል ቀጥተኛ የካሊብሬሽን ከርቭ ተፈጥሯል።ውጤቶቹ ከተለመዱት የ RT-PCR ዘዴዎች ጋር በጥሩ ሁኔታ ይስማማሉ.በለስ ላይ.5a(iii) የFAST-POCT መድረክ ከ40 ዑደቶች በኋላ የፍተሻ ውጤቶችን የፍሎረሰንት ምስሎችን ያሳያል።የ FAST-POCT መድረክ HAVን እስከ 102 ኮፒ/ml ዝቅተኛ መሆኑን ደርሰንበታል።ነገር ግን ባህላዊው ዘዴ በ102 ኮፒ/ሚሊ የሲቲ እሴት ስለሌለው ወደ 103 ኮፒ/ሚሊኤል LOD ያደርገዋል።ይህ ሊሆን የቻለው የአረፋ መቀላቀል ከፍተኛ ብቃት ስላለው ሊሆን እንደሚችል ገምተናል።የተለያዩ የማደባለቅ ዘዴዎችን ለመገምገም PCR የፈተና ሙከራዎች በተጣራ IAV አር ኤን ኤ ላይ ተካሂደዋል፤ እነዚህም የሼክ ማደባለቅ (በተለምዶ የ RT-PCR ኦፕሬሽን ተመሳሳይ የማደባለቅ ዘዴ)፣ የቪል ማደባለቅ (ይህ ዘዴ፣ 3 ሰ በ 0.12 ባር) እና እንደ ቁጥጥር ቡድን አለመቀላቀልን ጨምሮ። ..ውጤቶቹ በተጨማሪ ምስል S12 ውስጥ ይገኛሉ።ከፍ ባለ የአር ኤን ኤ ክምችት (106 ቅጂ / ml) ፣ የተለያዩ የማደባለቅ ዘዴዎች የሲቲ እሴቶች ከአረፋ ማደባለቅ ጋር ተመሳሳይ እንደሆኑ ማየት ይቻላል ።የአር ኤን ኤ ክምችት ወደ 102 ኮፒ/ሚሊ ሲወርድ፣ የሻክ ድብልቅ እና ቁጥጥሮች ምንም የሲቲ እሴት አልነበራቸውም፣ የአረፋ ቅልቅል ዘዴ አሁንም ሲቲ እሴት 36.9 ሲሰጥ፣ ይህም ከሲቲ ጣራ ከ38 በታች ነበር። ውጤቶቹ ዋነኛው የመቀላቀል ባህሪን ያሳያሉ። vesicles፣ በሌሎች ጽሑፎችም ታይቷል፣ ይህ ደግሞ ለምን የ FAST-POCT መድረክ ትብነት ከተለመደው RT-PCR ትንሽ ከፍ ያለ እንደሆነ ሊያብራራ ይችላል።በለስ ላይ.5b ከ 101 እስከ 106 ቅጂ / ml የሚደርሱ የተጣራ የ IBV አር ኤን ኤ ናሙናዎች PCR ትንታኔ ውጤቶችን ያሳያል.ውጤቶቹ ከ IAV ፈተና ጋር ተመሳሳይ ነበሩ፣ R2 = 0.994 እና LOD 102 ቅጂ/ml።
የ PCR ትንተና የኢንፍሉዌንዛ ኤ ቫይረስ (IAV) ከ IAV ክምችት ጋር ከ 106 እስከ 101 ቅጂ / ml TE ቋት እንደ አሉታዊ ቁጥጥር (ኤንሲ) በመጠቀም።(i) የእውነተኛ ጊዜ የፍሎረሰንት ከርቭ።(ii) በሎጋሪዝም IAV አር ኤን ኤ ትኩረት እና የዑደት ገደብ (ሲቲ) መካከል ያለው የመስመራዊ የካሊብሬሽን ጥምዝ ለ FAST እና ለተለመዱ የፍተሻ ዘዴዎች።(iii) IAV FAST-POCT የፍሎረሰንት ምስል ከ40 ዑደቶች በኋላ።ለ, PCR የኢንፍሉዌንዛ ቢ ቫይረስ (IBV) ከ (i) በእውነተኛ ጊዜ የፍሎረሰንት ስፔክትረም መለየት።(ii) መስመራዊ የካሊብሬሽን ኩርባ እና (iii) ፈጣን-POCT IBV የፍሎረሰንት ምስል ከ40 ዑደቶች በኋላ።የ FAST-POCT መድረክን በመጠቀም ለ IAV እና IBV ዝቅተኛው የማወቅ (LOD) ወሰን 102 ኮፒ/ሚሊ ሲሆን ይህም ከተለመዱት ዘዴዎች (103 ቅጂ/ml) ያነሰ ነው።ለ IAV እና IBV c Multiplex የፈተና ውጤቶች።GAPDH እንደ አወንታዊ ቁጥጥር እና TE ቋት እንደ አሉታዊ ቁጥጥር ጥቅም ላይ የዋለው ብክለትን እና የጀርባ ማጉላትን ለመከላከል ነው።አራት የተለያዩ የናሙና ዓይነቶች ሊለዩ ይችላሉ፡ (1) GAPDH-ብቻ አሉታዊ ናሙናዎች ("IAV-/IBV-");(2) IAV ኢንፌክሽን ("IAV+/IBV-") ከ IAV እና GAPDH;(3) IBV ኢንፌክሽን ("IAV-/IBV+") ከ IBV እና GAPDH ጋር;(4) IAV/IBV ኢንፌክሽን ("IAV+/IBV+") ከ IAV፣ IBV እና GAPDH ጋር።ነጥብ ያለው መስመር የመነሻውን መስመር ያመለክታል።n = 6 ባዮሎጂያዊ ገለልተኛ ሙከራዎች ተካሂደዋል, መረጃው እንደ ± መደበኛ ልዩነት ይታያል.ጥሬ መረጃ እንደ ጥሬ ውሂብ ፋይሎች ቀርቧል።
በለስ ላይ.5c ለ IAV/IBV የማባዛት ሙከራ ውጤቶችን ያሳያል።እዚህ፣ የቫይረስ ሊዛት በተጣራ አር ኤን ኤ ምትክ እንደ ናሙና መፍትሄ ጥቅም ላይ ውሏል፣ እና ለ IAV፣ IBV፣ GAPDH (አዎንታዊ ቁጥጥር) እና TE ቋት (አሉታዊ ቁጥጥር) አራት ፕሪመርሮች በ FAST-POCT መድረክ ውስጥ በአራት የተለያዩ የምላሽ ክፍሎች ውስጥ ተጨምረዋል።ሊሆኑ የሚችሉ ብክለትን እና የጀርባ መሻሻልን ለመከላከል አወንታዊ እና አሉታዊ ቁጥጥሮች እዚህ ጥቅም ላይ ይውላሉ።ፈተናዎቹ በአራት ቡድኖች ተከፍለዋል: (1) GAPDH-አሉታዊ ናሙናዎች ("IAV-/IBV-");(2) IAV-የተበከለ ("IAV+/IBV-") ከ IAV እና GAPDH ጋር;(3) IBV-.የተበከለ (“IAV-”) -/IBV+”) IBV እና GAPDH;(4) IAV/IBV ("IAV+/IBV+") በ IAV፣ IBV እና GAPDH መበከል።በለስ ላይ.5c የሚያሳየው አሉታዊ ናሙናዎች በሚተገበሩበት ጊዜ, የፍሎረሰንት ጥንካሬ ΔRn የአዎንታዊ ቁጥጥር ክፍል 0.860 ነበር, እና ΔRn የ IAV እና IBV ከአሉታዊ ቁጥጥር (0.002) ጋር ተመሳሳይ ነው.ለ IAV+/IBV-፣ IAV-/IBV+ እና IAV+/IBV+ ቡድኖች፣ IAV/GAPDH፣ IBV/GAPDH እና IAV/IBV/GAPDH ካሜራዎች እንደቅደም ተከተላቸው ከፍተኛ የሆነ የፍሎረሰንት መጠን ሲያሳዩ ሌሎቹ ካሜራዎች ከበስተጀርባ የፍሎረሰንት ጥንካሬን ያሳያሉ። ከሙቀት ብስክሌት በኋላ የ 40 ደረጃ.ከላይ ከተጠቀሱት ፈተናዎች የ FAST-POCT መድረክ እጅግ በጣም ጥሩ ባህሪን ያሳየ ሲሆን በአንድ ጊዜ የተለያዩ የኢንፍሉዌንዛ ቫይረሶችን በሽታ አምጪ ተህዋስያን እንድንይዝ አስችሎናል።
የ FAST-POCT ክሊኒካዊ ተፈጻሚነት ለማረጋገጥ፣ ከ IB ታካሚዎች (n=18) እና IB ያልሆኑ ቁጥጥሮች (n=18) (ምስል 6a) 36 ክሊኒካዊ ናሙናዎችን (የአፍንጫ ስዋብ ናሙናዎችን) ሞከርን።የታካሚ መረጃ በማሟያ ሠንጠረዥ 3 ላይ ቀርቧል። የ IB ኢንፌክሽን ሁኔታ ራሱን ችሎ የተረጋገጠ ሲሆን የጥናቱ ፕሮቶኮል በዜጂያንግ ዩኒቨርሲቲ የመጀመሪያ ተባባሪ ሆስፒታል (ሃንግዙ፣ ዠይጂያንግ) ጸድቋል።እያንዳንዱ የሕመምተኞች ናሙና በሁለት ምድቦች ተከፍሏል.አንደኛው በ FAST-POCT የተሰራ ሲሆን ሁለተኛው በዴስክቶፕ PCR ሲስተም (SLAN-96P, ቻይና) የተሰራ ነው።ሁለቱም መመርመሪያዎች አንድ አይነት የመንጻት እና የመለየት ኪት ይጠቀማሉ።በለስ ላይ.6b የ FAST-POCT እና የመደበኛ ግልበጣ PCR (RT-PCR) ውጤቶችን ያሳያል።የፍሎረሰንስ ጥንካሬን (FAST-POCT) ከ -log2(ሲቲ) ጋር አነፃፅረነዋል፣ ሲቲ ለተለመደው RT-PCR የዑደት ገደብ ነው።በሁለቱ ዘዴዎች መካከል ጥሩ ስምምነት ነበር.FAST-POCT እና RT-PCR ከፒርሰን ጥምርታ (r) የ 0.90 እሴት (ስእል 6ለ) ጋር ጠንካራ አወንታዊ ትስስር አሳይተዋል።ከዚያ የFAST-POCTን የምርመራ ትክክለኛነት ገምግመናል።የፍሎረሰንት ኢንትንት (ኤፍኤል) አወንታዊ እና አሉታዊ ናሙናዎች እንደ ገለልተኛ የትንታኔ መለኪያ ቀርበዋል (ምስል 6 ሐ)።የ FL ዋጋዎች በ IB ታካሚዎች ውስጥ ከቁጥጥር የበለጠ ከፍ ያለ ነበሩ (**** P = 3.31 × 10-19; ባለ ሁለት ጭራ ቲ-ሙከራ) (ምስል 6d).በመቀጠል, የ IBV ተቀባይ ኦፕሬቲንግ ባህሪያት (ROC) ኩርባዎች ተቀርፀዋል.የምርመራው ትክክለኛነት በጣም ጥሩ ሆኖ አግኝተናል, በ 1 ኩርባ ስር ያለ ቦታ (ምስል 6e).እባኮትን ያስተውሉ ከ2020 ጀምሮ በኮቪድ-19 ምክንያት በቻይና ውስጥ የግዴታ ማስክ ማዘዙ፣ IBD ያለባቸውን ታካሚዎች ለይተን አናውቅም፣ ስለዚህ ሁሉም አዎንታዊ ክሊኒካዊ ናሙናዎች (ማለትም፣ የአፍንጫ swab ናሙናዎች) ለ IBV ብቻ ነበሩ።
ክሊኒካዊ ጥናት ንድፍ.የ 18 ታካሚ ናሙናዎች እና 18 የኢንፍሉዌንዛ ያልሆኑ መቆጣጠሪያዎችን ጨምሮ በአጠቃላይ 36 ናሙናዎች በ FAST-POCT መድረክ እና በተለመደው RT-PCR ተተነተነዋል።b በ FAST-POCT PCR እና በተለምዶ RT-PCR መካከል ያለውን የትንታኔ ወጥነት ይገምግሙ።ውጤቶቹ በአዎንታዊ መልኩ የተያያዙ ናቸው (Pearson r = 0.90).c በ 18 IB ታካሚዎች እና 18 መቆጣጠሪያዎች ውስጥ የፍሎረሰንት ጥንካሬ ደረጃዎች.d በ IB ታካሚዎች (+) ውስጥ, የ FL ዋጋዎች ከቁጥጥር ቡድን (-) (**** P = 3.31 × 10-19; ባለ ሁለት ጭራ ቲ-ሙከራ; n = 36).ለእያንዳንዱ ካሬ ቦታ, በማዕከሉ ውስጥ ያለው ጥቁር ጠቋሚው መካከለኛውን ይወክላል, እና የሳጥኑ የታችኛው እና የላይኛው መስመሮች በቅደም ተከተል 25 ኛ እና 75 ኛ ፐርሰንትል ይወክላሉ.ጢሙ ወደ ዝቅተኛው እና ከፍተኛው የመረጃ ነጥቦች ይዘልቃል፣ እነዚህም እንደ ውጭ የማይቆጠሩ ናቸው።ሠ ROC ጥምዝ.ነጥብ ያለው መስመር d ከ ROC ትንታኔ የተገመተውን የመነሻ እሴት ይወክላል።AUC ለ IBV ነው 1. ጥሬ መረጃ እንደ ጥሬ መረጃ ፋይል ነው የቀረበው።
በዚህ ጽሑፍ ውስጥ ለትክክለኛ POCT የሚያስፈልጉትን ባህሪያት የያዘውን FAST እናቀርባለን.የእኛ ቴክኖሎጂ ጥቅሞች የሚከተሉትን ያካትታሉ: (1) ሁለገብ መጠን (ካስኬድ, በአንድ ጊዜ, በቅደም ተከተል እና መራጭ), በፍላጎት መልቀቅ (ፈጣን እና ተመጣጣኝ የተተገበረ ግፊት መለቀቅ) እና አስተማማኝ ቀዶ ጥገና (በ 150 ዲግሪ ንዝረት) (2) የረጅም ጊዜ ማከማቻ. (2 ዓመታት የተፋጠነ ሙከራ, ክብደት መቀነስ ወደ 0.3% ገደማ);(3) ሰፋ ያለ የእርጥበት መጠን እና የመለጠጥ ችሎታ (እስከ 5500 cP) ካለው ፈሳሽ ጋር የመሥራት ችሎታ;(4) ቆጣቢ (የFAST-POCT PCR መሣሪያ የተገመተው የቁሳቁስ ዋጋ በግምት 1 የአሜሪካ ዶላር ነው)።ሁለገብ አከፋፋዮችን በማጣመር፣ የተቀናጀ FAST-POCT የ PCR የኢንፍሉዌንዛ ኤ እና ቢ ቫይረሶችን ለመለየት የሚያስችል መድረክ ታይቶ ተተግብሯል።FAST-POCT የሚወስደው 82 ደቂቃ ብቻ ነው።በ36 ናዝል ስዋብ ናሙናዎች የተካሄዱት ክሊኒካዊ ሙከራዎች ከመደበኛ RT-PCR (Pearson Coefficients> 0.9) ጋር በፍሎረሰንሰንስ ጥንካሬ ውስጥ ጥሩ ቅንጅት አሳይተዋል።በ36 ናዝል ስዋብ ናሙናዎች የተካሄዱት ክሊኒካዊ ሙከራዎች ከመደበኛ RT-PCR (Pearson Coefficients> 0.9) ጋር በፍሎረሰንሰንስ ጥንካሬ ውስጥ ጥሩ ቅንጅት አሳይተዋል።Клинические тесты с 36 образцами песни: ЦР (koэffefytsyentы ፒርሶና > 0,9)።ክሊኒካዊ ሙከራዎች በ 36 የአፍንጫ መታጠቢያዎች ናሙናዎች ከመደበኛ RT-PCR (Pearson's Coefficients> 0.9) የፍሎረሰንት መጠን ጋር ጥሩ ስምምነት አሳይተዋል.RT-PCR Клинические испытания 36 | ПЦР (ኮэффициеnt Пирсона > 0,9)።የ36 ናዝል ስዋብ ናሙናዎች ክሊኒካዊ ሙከራ የፍሎረሰንስ ጥንካሬን ከመደበኛ RT-PCR (Pearson's Coefficient> 0.9) ጋር ጥሩ ስምምነት አሳይቷል።ከዚህ ሥራ ጋር በትይዩ፣ የተለያዩ ብቅ ያሉ ባዮኬሚካላዊ ዘዴዎች (ለምሳሌ፣ የፕላዝማ ቴርማል ብስክሌት፣ ማጉላት-ነጻ immunoassays፣ እና nanobody functionalization assays) በPOCT ውስጥ አቅማቸውን አሳይተዋል።ነገር ግን ሙሉ በሙሉ የተቀናጀ እና ጠንካራ የPOCT መድረክ ባለመኖሩ እነዚህ ዘዴዎች የተለየ የቅድመ-ሂደት ሂደቶችን (ለምሳሌ አር ኤን ኤ isolation44፣ incubation45 እና wash46) መፈለጋቸው የማይቀር ሲሆን ይህም የላቁ የPOCT ተግባራትን ተግባራዊ ለማድረግ ከእነዚህ ዘዴዎች ጋር ያለውን ስራ የበለጠ ያሟላል። አስፈላጊዎቹ መለኪያዎች.አምጣ-በ-ምላሽ-ውፅዓት አፈጻጸም.በዚህ ሥራ የ FAST ቫልቭን ለማንቃት የሚያገለግለው የአየር ፓምፑ ወደ ቤንችቶፕ መሳሪያ (ምስል S9, S10) ለመዋሃድ ትንሽ ቢሆንም አሁንም ከፍተኛ ኃይል ይጠቀማል እና ጫጫታ ይፈጥራል.በመርህ ደረጃ, ትናንሽ ቅርጽ ያላቸው የአየር ግፊት ፓምፖች በሌሎች ዘዴዎች ለምሳሌ ኤሌክትሮማግኔቲክ ኃይልን ወይም የጣት ማንቀሳቀሻን መጠቀም ይችላሉ.ተጨማሪ ማሻሻያዎች ለምሳሌ ለተለያዩ እና ለተወሰኑ ባዮኬሚካላዊ ሙከራዎች ኪት መላመድ፣ ማሞቂያ/ማቀዝቀዝ የማያስፈልጋቸው አዳዲስ የፍተሻ ዘዴዎችን በመጠቀም ለ PCR አፕሊኬሽኖች ከመሳሪያ ነፃ የሆነ የPOCT መድረክ ማቅረብን ሊያካትቱ ይችላሉ።የ FAST መድረክ ፈሳሾችን ለመቆጣጠር የሚያስችል መንገድ እንደሚሰጥ እናምናለን ፣ የታቀደው የ FAST ቴክኖሎጂ ለባዮሜዲካል ምርመራ ብቻ ሳይሆን ለአካባቢ ቁጥጥር ፣ የምግብ ጥራት ምርመራ ፣ የቁሳቁስ እና የመድኃኒት ውህደት የጋራ መድረክ የመፍጠር አቅም እንዳለው እናምናለን። ..
የሰው ልጅ የአፍንጫ እጥበት ናሙናዎችን መሰብሰብ እና መጠቀም በዜይጂያንግ ዩኒቨርሲቲ የመጀመሪያ ተባባሪ ሆስፒታል (IIT20220330B) የስነምግባር ኮሚቴ ጸድቋል።16 ጎልማሶች <30 አመት, 7 ጎልማሶች> 40 አመት, እና 19 ወንዶች, 17 ሴቶችን ያካተተ 36 የአፍንጫ መታጠቢያ ናሙናዎች ተሰብስበዋል.16 ጎልማሶች <30 አመት, 7 ጎልማሶች> 40 አመት, እና 19 ወንዶች, 17 ሴቶችን ያካተተ 36 የአፍንጫ መታጠቢያ ናሙናዎች ተሰብስበዋል.Было собрано 36 образцв мазков из носа, в которых принял участие 16 vzroslyh < 30 лет, 7 взрослутрых 1 እና 17 женщин.ሠላሳ ስድስት የአፍንጫ መታጠቢያ ናሙናዎች ከ 16 ጎልማሶች< 30 ዓመት ዕድሜ, 7 አዋቂዎች ከ 40 ዓመት በላይ, 19 ወንዶች እና 17 ሴቶች ተሰብስበዋል..የስነሕዝብ መረጃ በማሟያ ሠንጠረዥ 3 ላይ ቀርቧል። በመረጃ ላይ የተመሰረተ ስምምነት ከሁሉም ተሳታፊዎች ተገኝቷል።ሁሉም ተሳታፊዎች ኢንፍሉዌንዛ እንዳለባቸው ተጠርጥረው ያለ ምንም ካሳ በፈቃደኝነት ተፈትነዋል።
የ FAST መሰረት እና ክዳን ከፖሊላቲክ አሲድ (PLA) እና በ Ender 3 Pro 3D አታሚ (ሼንዘን ትራንሴንድ 3 ዲ ቴክኖሎጂ Co., Ltd.) ታትሟል.ባለ ሁለት ጎን ቴፕ የተገዛው ከአድሴቭስ ሪሰርች ኢንክ ሞዴል 90880 ነው። 100 µm ውፍረት ያለው PET ፊልም ከማክማስተር-ካር ተገዝቷል።ሁለቱም ማጣበቂያው እና ፒኢቲ ፊልም የተቆረጡት ከ Silhouette Cameo 2 መቁረጫ ከ Silhouette America, Inc. በመጠቀም ነው። የመለጠጥ ፊልሙ ከፒዲኤምኤስ ቁሳቁስ በመርፌ ቀረጻ የተሰራ ነው።በመጀመሪያ፣ 200µm ውፍረት ያለው የPET ፍሬም በሌዘር ሲስተም ተቆርጦ 100 μm ባለ ሁለት ጎን ማጣበቂያ ቴፕ በመጠቀም ከ3 ሚሜ ውፍረት ካለው PMMA ሉህ ጋር ተጣብቋል።የ PDMS ቅድመ ሁኔታ (Sylgard 184; ክፍል A: ክፍል B = 10: 1, Dow Corning) ወደ ሻጋታው ውስጥ ፈሰሰ እና ከመጠን በላይ ፒዲኤምኤስን ለማስወገድ የመስታወት ዘንግ ጥቅም ላይ ይውላል.በ 70 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለ 3 ሰዓታት ከታከመ በኋላ, 300 μm ውፍረት ያለው የፒዲኤምኤስ ፊልም ከሻጋታው ሊላጥ ይችላል.
ፎቶዎች ለሁለገብ ስርጭት፣ በፍላጎት ህትመት እና አስተማማኝ አፈፃፀም በከፍተኛ ፍጥነት ባለው ካሜራ (Sony AX700 1000fps) ይነሳሉ ።በአስተማማኝ ፈተና ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው የምሕዋር መንቀጥቀጥ የተገዛው ከ SCILOGEX (SCI-O180) ነው።የአየር ግፊቱ የሚመነጨው በአየር መጭመቂያ ነው, እና በርካታ የዲጂታል ትክክለኛነት ግፊት መቆጣጠሪያዎች የግፊት እሴቱን ለማስተካከል ጥቅም ላይ ይውላሉ.የፍሰት ባህሪ ሙከራ ሂደቱ እንደሚከተለው ነው.አስቀድሞ የተወሰነ መጠን ያለው ፈሳሽ በሙከራ መሳሪያው ውስጥ ገብቷል እና ከፍተኛ ፍጥነት ያለው ካሜራ የፍሰት ባህሪን ለመመዝገብ ጥቅም ላይ ውሏል።አሁንም ምስሎች በተወሰነ ጊዜ የፍሰት ባህሪን ከሚያሳዩ ቪዲዮዎች የተወሰዱ ሲሆን የተቀረው ቦታ ደግሞ Image-Pro Plus ሶፍትዌር በመጠቀም ይሰላል፣ ከዚያም ድምጹን ለማስላት በካሜራው ጥልቀት ተባዝቷል።የፍሰት ባህሪ ሙከራ ስርዓት ዝርዝሮች በማሟያ ምስል S4 ውስጥ ይገኛሉ።
50 μl የማይክሮ ቢላዶች እና 100 μል የተዳከመ ውሃ ወደ ብልቃጥ መቀላቀያ መሳሪያው ውስጥ ያስገቡ።የተቀላቀሉ ፎቶግራፎች በከፍተኛ ፍጥነት ባለው ካሜራ በየ0.1 ሰከንድ በ0.1 ባር፣ 0.15 ባር እና 0.2 ባር ግፊት ይወሰዳሉ።በማዋሃድ ሂደት ውስጥ የፒክሰል መረጃ ከእነዚህ ምስሎች የፎቶ ማቀናበሪያ ሶፍትዌር (Photoshop CS6) በመጠቀም ማግኘት ይቻላል።እና የመቀላቀል ቅልጥፍናን በሚከተለው ቀመር 53 ማግኘት ይቻላል.
M የማደባለቅ ቅልጥፍና፣ N አጠቃላይ የናሙና ፒክስሎች ብዛት ነው፣ እና ci እና \(\bar{c}\) መደበኛ እና የሚጠበቁ መደበኛ ውህዶች ናቸው።የማደባለቅ ቅልጥፍና ከ 0 (0%, ያልተቀላቀለ) እስከ 1 (100%, ሙሉ በሙሉ የተደባለቀ) ይደርሳል.ውጤቶቹ በተጨማሪ ምስል S6 ውስጥ ይታያሉ።
የእውነተኛ ጊዜ RT-PCR ኪት ለ IAV እና IBV፣ IAV እና IBV አር ኤን ኤ ናሙናዎችን ጨምሮ (ድመት ቁጥር RR-0051-02/RR-0052-02፣ Liferiver፣ China)፣ Tris-EDTA ቋት (TE ቋት ቁ. B541019) , ሳንጎን ባዮቴክ, ቻይና), አዎንታዊ የመቆጣጠሪያ አር ኤን ኤ ማጽጃ ኪት (ክፍል ቁጥር Z-ME-0010, Liferiver, China) እና GAPDH Solution (ክፍል ቁጥር M591101, ሳንጎን ባዮቴክ, ቻይና) በንግድ ይገኛሉ.የአር ኤን ኤ የመንጻት ኪት ማሰሪያ ቋት ፣ ማጠቢያ A ፣ wash W ፣ eluent ፣ መግነጢሳዊ ማይክሮቦች እና አሲሪሊክ ተሸካሚን ያጠቃልላል።IAV እና IBV ቅጽበታዊ RT-PCR ኪት የIFVA ኑክሊክ አሲድ PCR ማወቂያ ድብልቅ እና RT-PCR ኢንዛይም ያካትታሉ።6 µl AcrylCarrier እና 20 µl ማግኔቲክ ዶቃዎች ወደ 500 µl ማሰሪያ ቋት መፍትሄ ጨምሩ እና በደንብ ይንቀጠቀጡ እና ከዚያም የዶቃውን መፍትሄ ያዘጋጁ።21 ሚሊ ሊትር ኤታኖል ይጨምሩ A እና W ለማጠቢያዎች በደንብ ይንቀጠቀጡ, እንደ ቅደም ተከተላቸው ማጠቢያዎች A እና W መፍትሄዎችን ለማግኘት.ከዚያም 18 µl የፍሎረሰንት ፒሲአር ድብልቅ ከIFVA ኑክሊክ አሲድ እና 1 µl የ RT-PCR ኢንዛይም ወደ 1 μl TE መፍትሄ ተጨምረዋል፣ ተናወጠው እና ለብዙ ሴኮንዶች ሴንትሪፉድ ተደርገዋል፣ 20 μl IAV እና IBV primers አግኝተዋል።
የሚከተለውን አር ኤን ኤ የማጥራት ሂደት ይከተሉ፡ (1) አር ኤን ኤ ማስተዋወቅ።ፒፔት 526 µl የፔሌት መፍትሄ ወደ 1.5 ሚሊር ሴንትሪፉጅ ቱቦ እና 150 µl ናሙና ይጨምሩ እና ከዚያ በእጅ ቱቦውን 10 ጊዜ ወደ ላይ እና ወደ ታች ያናውጡት።ድብልቁን 676 µl ወደ አፊኒቲ አምድ እና ሴንትሪፉጅ በ1.88 x 104 ግ ለ60 ሰከንድ ያስተላልፉ።ከዚያም ተከታይ የፍሳሽ ማስወገጃዎች ይጣላሉ.(2) የመጀመሪያው የመታጠብ ደረጃ.500 µl ማጠቢያ መፍትሄ A በአፊኒቲ አምድ ላይ፣ ሴንትሪፉል በ1.88 x 104 ግ ለ40 ሰከንድ እና ያጠፋውን መፍትሄ ያስወግዱት።ይህ የመታጠብ ሂደት ሁለት ጊዜ ተደግሟል.(3) ሁለተኛው የመታጠብ ደረጃ.500 µl ማጠቢያ መፍትሄ W ወደ አፊኒቲቲ አምድ ይጨምሩ፣ ሴንትሪፉል በ1.88×104 ግ ለ15 ሰከንድ እና ያጠፋውን መፍትሄ ያስወግዱት።ይህ የመታጠብ ሂደት ሁለት ጊዜ ተደግሟል.(4) ኢሉሽን።200 µl ኤሉሬትን ወደ አፊኒቲው አምድ እና ሴንትሪፉጅ በ1.88 x 104 ግ ለ2 ደቂቃ ይጨምሩ።(5) RT-PCR: ኤሉቴቱ በ PCR ቱቦ ውስጥ በ 20 μl የፕሪመር መፍትሄ ውስጥ ገብቷል, ከዚያም ቱቦው በእውነተኛ ጊዜ PCR የሙከራ መሳሪያ (SLAN-96P) ውስጥ የ RT-PCR ሂደትን ለማካሄድ ተደረገ.አጠቃላይ የፍተሻ ሂደቱ በግምት 140 ደቂቃዎችን ይወስዳል (ለአር ኤን ኤ ንፅህና 20 ደቂቃዎች እና PCR ን ለማግኘት 120 ደቂቃዎች)።
526 µl የዶቃ መፍትሄ፣ 1000 µl የመታጠቢያ መፍትሄ A፣ 1000 µl ማጠቢያ መፍትሄ W፣ 200 μl eliate እና 20µl የፕሪመር መፍትሄ በቅድሚያ ተጨምሮ በክፍል M፣ W1፣ W2፣ E እና PCR ማወቂያ ክፍሎች ውስጥ ተከማችቷል።የመድረክ ስብሰባ.ከዚያም፣ 150 µl የናሙናውን ቱቦ ወደ ክፍል M እና የ FAST-POCT መድረክ በተጨማሪ ምስል S9 ላይ በሚታየው የሙከራ መሣሪያ ውስጥ ገብቷል።ከ 82 ደቂቃዎች በኋላ, የምርመራው ውጤት ተገኝቷል.
በሌላ መልኩ ካልተገለጸ በቀር፣ ሁሉም የፈተና ውጤቶች በአማካይ ± ኤስዲ የሚቀርቡት በትንሹ ከስድስት ድግግሞሽ በኋላ የ FAST-POCT መድረክን እና ከባዮሎጂካል ነጻ የሆኑ ናሙናዎችን በመጠቀም ነው።ከመተንተን ምንም ውሂብ አልተካተተም።ሙከራዎቹ በዘፈቀደ አይደሉም።ተመራማሪዎቹ በሙከራው ወቅት የቡድን ተግባራትን ዓይነ ስውር አልነበሩም.
በጥናት ንድፍ ላይ ተጨማሪ መረጃ ለማግኘት ከዚህ ጽሁፍ ጋር የተገናኘውን የተፈጥሮ ምርምር ዘገባን ይመልከቱ።
የዚህን ጥናት ውጤት የሚደግፉ መረጃዎች በማሟያ መረጃ ውስጥ ይገኛሉ።ይህ ጽሑፍ ዋናውን ውሂብ ያቀርባል.
ቻግላ፣ ዜድ እና ማድሁካር፣ ፒ. ኮቪድ-19 በበለጸጉ አገራት ውስጥ ያሉ ማበረታቻዎች ለሁሉም ክትባቶችን ያዘገያሉ።ቻግላ፣ ዜድ እና ማድሁካር፣ ፒ. ኮቪድ-19 በበለጸጉ አገራት ውስጥ ያሉ ማበረታቻዎች ለሁሉም ክትባቶችን ያዘገያሉ።ቻግላ፣ ዜድ እና ማድሁካር፣ ፒ. ኮቪድ-19 በበለጸጉ አገሮች ውስጥ ያሉ ማበረታቻዎች ለሁሉም ሰው የሚሆን ክትባቶችን ያዘገያሉ።ቻግላ፣ ዜድ እና ማድሁከር፣ ፒ. ኮቪድ-19 በበለጸጉ አገሮች ውስጥ መከተብ ለሁሉም ሰው እንዲዘገይ ያደርጋል።ብሔራዊ ሕክምና.27፣ 1659–1665 (2021)።
Faust, L. et al.ዝቅተኛ እና መካከለኛ ገቢ ባላቸው አገሮች ውስጥ SARS-CoV-2 ሙከራ፡ በግሉ የጤና አጠባበቅ ዘርፍ ያለው ተገኝነት እና ተመጣጣኝነት።የማይክሮባላዊ ኢንፌክሽን.22፣ 511–514 (2020)።
የአለም ጤና ድርጅት.በጾታዊ ግንኙነት የሚተላለፉ የተመረጡ በሽታዎች ስርጭት እና ክስተቶች፡ ግምገማ እና ግምቶች።ጄኔቫ፡ WHO፣ WHO/HIV_AIDS/2 https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/66818/WHO_HIV_AIDS_2001.02.pdf (2001)።
ፌንቶን, ኤም እና ሌሎች.ባለብዙ 2D የተቀረጹ የጎን ፍሰት የሙከራ ቁራጮች።የ ASS መተግበሪያ.አልማ ማዘር.ኢንተር ሚላን።1፣ 124–129 (2009)።
ሺሊንግ፣ KM እና ሌሎችሙሉ በሙሉ የተዘጋ የማይክሮ ፍሎይዲክ ወረቀት ላይ የተመሰረተ ትንተና መሳሪያ።ፊንጢጣ.ኬሚካል.84, 1579-1585 (2012).
ላፔንተር, N. et al.ተወዳዳሪ ወረቀት ላይ የተመሰረተ ኢሚውኖክሮማቶግራፊ ከኤንዛይም የተሻሻሉ ኤሌክትሮዶች ጋር ተጣምሮ የሽቦ አልባ ክትትል እና የሽንት ኮቲንን ኤሌክትሮ ኬሚካል ለመወሰን ያስችላል።ዳሳሾች 21, 1659 (2021).
Zhu, X. እና ሌሎች.ግሉኮሜትር በመጠቀም ሁለገብ ናኖዚም የተቀናጀ የጎን ፈሳሽ መድረክ ጋር የበሽታ ባዮማርከርን መቁጠር።ባዮሎጂካል ዳሳሽ.ባዮኤሌክትሮኒክስ.126፣ 690–696 (2019)።
ቡ, ኤስ. እና ሌሎች.ኮንካናቫሊን A-human chorionic gonadotropin-Cu3(PO4)2 hybrid nanoflowers፣ ማግኔቲክ መለያየት እና ስማርት ስልክ ንባብን በመጠቀም በሽታ አምጪ ተህዋሲያንን ለመለየት የእርግዝና ምርመራ ስትሪፕ።ማይክሮ ኮምፒውተርመጽሔት.185, 464 (2018)